脑炎流行主要是由急性呼吸道感染引起的脑膜炎(Nm),作为目前人类呼吸道感染的一种传染病,脑部感染的来源主要是通过向量流动,向量流速主要与脑流量有关,频率调查一般采用细菌培养进行,目前脑部诊断方法主要是由于脑液、血液、抗生素治疗后的总体阳性指标明显下降。因此需要高效、敏感的方法进行细菌培养法测定。本文通过采用实时荧光定量PCR检测，具体研究情况如下：

1资料与方法

1.1一般资料

选取本研究为期3年，于2021年1月-2024年1月采集对象为健康人群咽拭子1000例，采样地区覆盖七区一县，应用传统方法进行细菌培养及用实时荧光定最PCR(ea-imne;PCR)方法进行群别鉴定，对鉴定阳性的菌进行分析。

1.2方法

细菌培养方法:样品采集者收集粪便样本,并用无菌板反复将无菌棉缓冲液涂抹在粪便壁上。在没有与口腔粘膜和舌头接触的情况下,巧克力琼脂糖进行了热绝缘,实验室培养,并选择了与可疑菌落培养相关的生化测试方法。

实时定量PCR方法:提取DNA,将200μl样品吸入离心管中,将1.5ml剂量注入离心管中,去除填料,沉淀后,添加100μl直接混合DNA,调整离心,采用4μl PCR与荧光PCR:MX3000PCR放大器用于PCR实验,根据反应混合物的配置,对阳性和阴性控制的循环参数,并根据结果。

1.3观察指标

病原菌阳性率情况。

1.4指标处理

选用的软件类型为SPSS统计包，具体为22.0版本，以t值方式予以处理的对象为计量指标，若干预前后同类指标显示P＜0.05，则达到统计目的。

2结果

通过对两组方式进行病原菌阳性率分析，细菌培养法、实时荧光定量PCR法整体阳性率分别为3.00％、5.00％，经比较，两组患者病原菌阳性率具有一定差异（p＜0.05）。

表1两组方式病原菌阳性率分析

3讨论

对影响患者健康的急性传染病,呕吐和发烧的临床研究表明,Nm脑膜炎的总死亡率很高^[1]。流脑患者通常伴有头痛,发烧,诊断为全脑脊液和血液分离。脑流病原体Nm通常存在于患者的上呼吸道中,通常是敏感的。传统的细菌培养方法通常经过更长时间的测试,而在样品运输过程中,患者在用抗菌药物治疗后容易发生细菌分离失败,从而降低了细菌培养的准确性。研究表明,细菌培养物的分离鉴定总体灵敏度不高,在使用灵敏度测试方法时具有一定的应用价值。目前广泛应用于定量荧光定量PCR,该方法使用荧光标记探针来提高特异性。通过使用CT值生成定量结果,可以防止平台对结果的影响,并提高方法的灵敏度。使用完全闭合反应后,一般不需要后处理,可以防止假阳性污染。测试过程中的实时检测使整个过程的结果高效自动化,荧光PCR定量分析具有通用的灵敏度和特异性,为Nm检测提供了技术手段。PCR技术可以扩展患者的脑流量和血液样本,提高核酸检测技术在荧光PCR的实施和应用中的灵敏度,现有的核酸检测技术自动化程度高,解决检测时的污染问题时间较短,效果好,可用于监测早期阶段和疾病的脑流量。

脑膜炎是多种病毒和细菌感染引起的颅内急性炎症。有四种类型，结核性脑膜炎，流行性脑脊髓膜炎，病毒性脑膜炎和化脓性脑膜炎。流行性脑膜炎和结核性脑膜炎具有传染性，一般都会通过空气飞沫传播。表现出现高热，头疼，恶心，呕吐，嗜睡，反复惊厥发作，癫痫，昏迷，颅内压增高，瞳孔不等大出现脑疝。如经过及时治疗能够完全治愈，少数遗留有后遗症及生命危险^[2]。

当前反映分析方法、检测系统分析性能的主要指标即为分析测量范围、临床可报告范围，对于实验室来说应引进、改变检测系统、方法的主要分析性能，随后对其进行验证、评价^[2]。检测系统、检验方法作为临床检验质量管理的相关内容，目前来说，AMR主要是指患者标本不经任何浓缩、稀释处理，在由检验方法、检测系统中从而获得可靠结果。作为反映仪器、分析方法性能的主要指标，也是保证检测方法的主要前提。在检测中采用电化学发光免疫法完成，通过综合分析、评价检测相关性能，以此为临床综合分析进行价值评估。目前检验结果的正确度性能一般通过多种途径进行评价，然而目前来说，对于卫生部临床检验中心提供的质量评价调查品来说，其测量偏差在可接受的范围内。临床研究表明，流脑的主要因素多种多样，患者的代谢也不同。流脑是一种常见疾病，总体发病率高。作为现阶段的基本检查方法，血液检测可以作为临床诊断的依据，有效反映患者的病情。临床应用广泛。因此，有必要改进血液检测技术，以加快疾病的诊断。准确度通过对定值的质控品、校准品进行测定并计算，正确度能够确认。铁蛋白水平的及时临床测定可以早期诊断疾病,为疾病的治疗提供良好的依据,为治疗的风险分级和预后提供良好的依据。铁蛋白不仅与患者的生存率有关,而且与身体活动受限有关。此外,循环稳定性的恢复可以反映生物体的病理生理学的变化。本实验品测定的高、低校正品来对系统正确度进行验证，整体均在允许范围内。

PCR技术在HBV中应用，效果理想，作为现阶段常用的分子生物学方法，具有较高的检测重复性，同时能够有效解决抗病毒药物疗效观察的难题，在联合其他技术进行应用时，具有一定的协同作用。使用化学发光免疫测定技术能够提升检验水平，在使用此种技术应用后线性动力学范围较宽，检验时光信号持续时间较长，对于疾病诊断来说具有重要价值^[3]。

为了测试患者的化学发光免疫力，使用测试设备来增强免疫力。测量和观察与材料匹配的亮度，并根据测试结果计算相应的测试结果数据，使患者的化学发光免疫分析的总体优势、误差、实用性和疾病诊断相对于放射免疫分析更加准确和灵敏。

PCR技术是我国常用的一种基本检测方法。由于该检测方法方便、检测速度快、成本低，实现了对病毒血清标志物的定向分析，但定量分析具有一定的局限性。高血清水平在一定程度上避免了人为误差，提高了正确定量分析的能力——电磁的快速消失有利于游离抗体和复合抗体的分离。玻璃抗体阳性可影响患者的检出率，提高PCR技术的专业化程度。常见的流感病毒诊断方法包括血清学诊断、病毒分离和抗体检测，但如果爆发新的重症流感病毒，可能没有毒株抗体。一种有效的快速检测方法，但阳性率低容易导致假阴性问题——荧光PCR法实时检测PCR扩增反应中每个循环产物的荧光信号，这使定量和定性分析的应用成为可能。

电磁性的快速消失有利于自由和复合抗体的分离,玻璃体阳性抗体将影响患者检出率的提高,并提高PCR技术的特异性。流感病毒的常见诊断方法包括血清学诊断,病毒分离,特异性抗体等。然而,如果一种新的严重流感病毒爆发,这种毒株的抗体可能很快就会不可用,这将使血清学分析变得不可能。因此,病毒核酸检测方法对于病原体的早期检测至关重要^[7]。胶原蛋白快速测试的优点是操作简单,并在20分钟内快速获得测试结果。无需特殊设备,操作员易于培训,是快速检查的有效手段,但阳性率低,容易出现虚假的负面问题。荧光PCR在PCR扩增反应中实时检测每个循环产物的荧光信号,允许对早期模型进行定量和定性分析。尽管实时引入荧光PCR化学物质,但PCR反应仍在继续,PCR反应产物积累,荧光信号强度成比例增加。通过实时荧光动态监测,可以定性和定量分析PCR产物。具有特异性高、灵敏度高、速度快、简便、成本低等优点,流感病毒检测可在3-4小时内完成,达到核酸检测的封闭操作,克服了正常PCR污染的缺点。用于检测点标记的两个荧光素FAM和Joe的发射波长相距很远,因此荧光波长相似,以防止相互干扰并确保实验的特异性和敏捷性。随着全球流感疫情的加剧,对传染病检测的要求越来越高,荧光PCR法可以快速有效地检测流感病毒。

参考文献：

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[7]雷永良,陈秀英,叶碧峰,等.实时荧光定量PCR技术用于脑膜炎奈瑟菌的快速检测[J].中国卫生检验杂志,2009,19(11):2586-2587.

作者简介：杨艳梅(1978—),女,汉族,江苏人,本科,副主任技师,研究方向为微生物检验及脑膜炎奈瑟菌研究｡

基金项目：课题名称：乌市健康人群流行性脑脊髓膜炎奈瑟菌带菌率调查及分子分型研究，项目编号：SJK2021002。