乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤，术前新辅助化疗（NAC）广泛应用于局部晚期或高风险早期乳腺癌患者，不仅可缩小肿瘤体积，还可能改变肿瘤微环境，增强免疫应答^[1]。肿瘤微环境由基质、血管系统及免疫细胞组成，在肿瘤发展及治疗反应中至关重要。NAC对血管生成、基质重塑及免疫细胞浸润的影响尚存争议，因此本研究对比NAC对乳腺癌患者肿瘤微环境及免疫细胞浸润的作用，以期为个体化治疗提供依据。

1资料与方法

1.1研究对象

本研究收集2021年1月—2023年12月某医院确诊并接受治疗的乳腺癌患者50例，所有患者均经影像学检查及病理活检确诊为乳腺浸润性癌，符合美国癌症联合委员会（AJCC）第8版乳腺癌分期标准的II-III期标准。根据是否接受新辅助化疗（NAC），将患者分为实验组（接受NAC，n=25）和对照组（未接受NAC，n=25）。

纳入标准包括：①年龄30-50岁，ECOG体能评分≤2分；乳腺浸润性癌明确诊断；③实验组患者接受至少4个周期标准NAC，且疗效评估完成；④术后病理组织完整可行相关分析。

排除标准：①合并其他恶性肿瘤或严重免疫系统疾病；②既往接受过乳腺癌放化疗；③术前出现远处转移；④伴有严重肝肾功能不全、心血管疾病或其他影响研究的病理状态。

1.2研究方法

1.2.1 新辅助化疗方案

实验组患者接受标准NAC方案，包含蒽环类+紫杉类联合化疗（EC-T方案）：表柔比星（Epirubicin）90 mg/m²+环磷酰胺（Cyclophosphamide）600 mg/m²，每21天为1个周期，连续4个周期；随后给予多西他赛（Docetaxel）75 mg/m²，每21天为1个周期，共4个周期。化疗期间所有患者接受标准止吐及肝肾保护治疗。

1.2.2组织标本采集

所有患者术后获取肿瘤组织标本，立即固定于10%中性福尔马林溶液中，常规石蜡包埋，切片厚度为4μm。所有标本均经HE染色及免疫组织化学（IHC）检测，以评估肿瘤微环境及免疫细胞浸润情况。

1.2.3免疫组化检测

采用SP immunohistochemical staining技术，使用以下抗体：抗CD31（血管标志，1:200，Abcam），抗CD3（T细胞总数标志，1:100，CST），抗CD8（细胞毒性T细胞标志，1:150，Dako），抗CD68（M1/M2巨噬细胞标志，1:200，Abcam），抗CD56（NK细胞标志，1:100，Dako）。切片脱蜡水化后，进行柠檬酸缓冲液高温抗原修复，并采用DAB显色，苏木精复染，显微镜下观察染色结果。

1.2.4评价指标

肿瘤微环境分析：采用ImageJ软件计算CD31阳性表达区域，评估微血管密度（MVD），以MVD ≥ 20/HPF 作为高血管生成水平；采用Masson三色染色法检测基质胶原沉积情况，计算胶原光密度值。

免疫细胞浸润分析：T细胞（CD3+）、细胞毒性T细胞（CD8+）、巨噬细胞（CD68+）、NK细胞（CD56+）阳性细胞计数，每例患者随机选取5个高倍视野（400×），计算每个视野的阳性细胞数，取平均值进行统计分析。

1.3统计学分析

采用SPSS 26.0软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差（x̄±s）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料以率（%）表示，采用χ²检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1术前新辅助化疗对乳腺癌肿瘤微环境的影响

如表1，实验组患者术后肿瘤组织中CD31阳性表达显著低于对照组（MVD：18.5±5.6 vs. 26.3±7.1，P<0.05），提示NAC可显著降低乳腺癌组织的血管密度。Masson染色显示，实验组胶原沉积面积占比低于对照组（26.4%±4.5% vs. 35.7%±5.2%，P<0.05），说明NAC可能通过影响基质重塑降低肿瘤细胞的生存屏障。

表 1 乳腺癌患者NAC对肿瘤微环境及免疫细胞浸润影响

2.2术前新辅助化疗对免疫细胞浸润的影响

如表1，实验组CD3+ T细胞浸润水平显著高于对照组（48.2±8.9 cells/HPF vs. 32.7±6.4 cells/HPF，P<0.05）。CD8+ T细胞浸润增加（24.5±4.8 cells/HPF vs. 15.2±3.6 cells/HPF，P<0.05），提示NAC可能增强抗肿瘤免疫应答。此外，CD68+巨噬细胞浸润水平在实验组显著升高（35.6±5.7 cells/HPF vs. 27.1±4.8 cells/HPF，P<0.05），而CD56+ NK细胞浸润也有所增强（18.9±3.5 cells/HPF vs. 10.7±2.9 cells/HPF，P<0.05），表明NAC可能有助于恢复机体的固有免疫监视作用。

3讨论

3.1术前新辅助化疗对乳腺癌肿瘤微环境的作用机制

NAC可通过降低肿瘤血管生成，减少氧供及营养支持，从而抑制肿瘤生长。其可能作用机制包括VEGF通路抑制及内皮细胞凋亡的诱导。此外，NAC可能通过调节基质金属蛋白酶（MMPs）表达水平，降低细胞外基质（ECM）屏障，使免疫细胞更易渗透肿瘤核心区域。

3.2术前新辅助化疗对免疫微环境的调节作用

NAC增强CD8+ T细胞和NK细胞浸润可能与其诱导肿瘤抗原释放、促进树突细胞（DC）成熟有关。CD68+巨噬细胞的增加可能反映出M1表型比例提升，这有助于增强肿瘤微环境中的炎症反应，抑制肿瘤进展。

4结论

术前NAC可显著改变乳腺癌患者的肿瘤微环境，减少血管生成，提高免疫细胞浸润水平，增强抗肿瘤免疫应答^[2]。本研究结果支持NAC作为乳腺癌个体化治疗策略的重要组成部分，并提示可联合免疫治疗进一步提高治疗效果^[3]。

参考文献

[1]朱彦芳.基于MRI特征乳腺癌术前新辅助化疗疗效的预测[D].宁夏医科大学,2023.000357.

[2]黎鹏飞,杜鑫杰,廖椿涛,等.乳腺癌患者术前采用新辅助化疗的效果[J].中外医学研究,2022,20(16):120-123.

[3]王惠.术前新辅助化疗对乳腺癌患者术后认知功能障碍的影响[D].广西医科大学,2022.001180.