肺癌作为全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，其远处转移是导致患者治疗失败及预后不良的核心因素^[1]。ⅢB-Ⅳ期肺癌患者已错失手术根治机会，常规化疗虽能延缓病情进展，但对肿瘤细胞迁移侵袭的抑制作用有限，5年生存率仍较低^[2]。因此，寻找安全有效的辅助治疗手段以阻断肿瘤转移通路，成为当前肺癌治疗领域的研究热点。孢子油作为药用真菌的活性提取物，其主要成分三萜类化合物已被体外实验证实具有抗炎、抗氧化及抑制肿瘤细胞增殖的作用^[3]。然而，关于其在临床场景中对肺癌细胞迁移与侵袭能力的调控效应及作用机制，目前尚缺乏系统性研究。本研究通过前瞻性对照设计，探讨孢子油成分联合常规化疗对ⅢB-Ⅳ期肺癌患者癌细胞迁移侵袭能力的影响，分析其与迁移相关蛋白表达的关联，为其临床应用提供循证依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2024年1月至2025年6月在本院肿瘤科确诊的82例肺癌患者。纳入标准：（1）经病理组织学或细胞学检查确诊为非小细胞肺癌，临床分期为ⅢB-Ⅳ期（依据国际肺癌研究协会第八版分期标准）；（2）年龄40-75岁，体力状况评分（ECOG）0-2分；（3）未接受过放化疗或靶向治疗，或末次治疗结束时间超过6个月；（4）肝肾功能、血常规及凝血功能基本正常，无严重基础疾病；（5）患者及家属知情同意并签署知情同意书。排除标准：（1）合并其他恶性肿瘤；（2）存在活动性感染、自身免疫性疾病或严重心脑血管疾病；（3）对孢子油成分或化疗药物过敏；（4）依从性差，无法完成规定疗程及随访；（5）妊娠或哺乳期女性。

随机分为对照组和研究组，每组41例。对照组：男23例，女18例；年龄42-74（58.96±7.14）岁；病理类型：腺癌25例，鳞癌16例；ⅢB期28例，Ⅳ期13例。研究组：男22例，女19例；年龄40-75（59.01±6.98）岁；病理类型：腺癌24例，鳞癌17例；ⅢB期26例，Ⅳ期15例。两组一般资料比较，P>0.05。

1.2方法

对照组：接受常规化疗方案，根据病理类型选择不同方案：腺癌患者采用培美曲塞（500mg/m²，第1天）联合顺铂（75mg/m²，第1-3天）方案；鳞癌患者采用吉西他滨（1000mg/m²，第1、8天）联合顺铂（75mg/m²，第1-3天）方案，每21天为1个周期，连续治疗2个周期（共8周）。

研究组在对照组化疗方案基础上联合孢子油制剂研究组在常规组化疗方案基础上加用孢子油软胶囊（品牌：KINARO，规格：1000mg/份，瓶标含三萜类成分≥80.3%）治疗，口服，每日3次，与化疗同步开始，连续干预8周。

治疗期间两组均给予止吐、保肝、护胃等对症支持治疗。

1.3标本采集

分别于干预前及干预8周后采集标本：（1）外周血标本：空腹采集肘静脉血5mL，EDTA抗凝，采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，置于-80℃冰箱冻存备用；（2）肿瘤组织标本：通过CT引导下经皮肺穿刺或支气管镜活检获取肿瘤组织，部分置于4%多聚甲醛溶液中固定，部分置于液氮中速冻后转移至-80℃冰箱保存。

1.4检测指标与方法

1.4.1癌细胞迁移与侵袭能力检测

采用Transwell小室实验检测。迁移实验：将分离的外周血单个核细胞调整浓度至5×10⁵/mL，取200μL接种于Transwell小室上室，下室加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基600μL，37℃、5%CO₂培养箱中培养24h。侵袭实验：小室上室预先铺被Matrigel基质胶（1:8稀释），其余步骤同迁移实验。培养结束后，用棉签擦去上室未迁移/侵袭的细胞，4%多聚甲醛固定15min，0.1%结晶紫染色20min，显微镜下（×200）随机选取5个视野计数穿膜细胞数，计算迁移穿透率及侵袭率。迁移穿透率（%）=（实验组穿膜细胞数/对照组穿膜细胞数）×100%；侵袭率（%）计算方法同迁移穿透率。

1.4.2迁移相关蛋白表达检测

采用WesternBlot法检测肿瘤组织中MMP-2、MMP-9及E-钙黏蛋白的表达水平。提取肿瘤组织总蛋白，BCA法测定蛋白浓度。取50μg蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，转印至PVDF膜，5%脱脂牛奶封闭2h，加入一抗（MMP-2、MMP-9、E-钙黏蛋白及β-actin，稀释比例均为1:1000），4℃孵育过夜。TBST洗膜后，加入二抗（HRP标记，稀释比例1:5000），室温孵育1h。ECL化学发光法显影，ImageJ软件定量分析条带灰度值，以目标蛋白与内参蛋白β-actin灰度值的比值表示蛋白相对表达水平。

1.4.3血清肿瘤标志物检测

采用电化学发光免疫分析法检测血清CEA、CYFRA21-1水平。仪器为罗氏Cobase601全自动电化学发光免疫分析仪，试剂为配套原装试剂，严格按照试剂盒说明书操作。参考值范围：CEA<5ng/mL，CYFRA21-1<3.3ng/mL。

1.5不良反应评估

参照世界卫生组织（WHO）抗肿瘤药物不良反应分级标准（0-Ⅳ级），记录治疗期间两组患者恶心呕吐、白细胞减少、血小板减少、脱发及肝功能异常等不良反应发生情况。

1.6统计学方法

运用SPSS26.0软件，计数资料以%表示，行x²检验，计量资料以（±s）表示，行t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1癌细胞迁移与侵袭能力比较

干预8周后，两组癌细胞迁移穿透率及侵袭率均较干预前降低（P<0.05），研究组降低幅度大于对照组（P<0.05）。见表1。

表1癌细胞迁移与侵袭能力比较（±s，%）

2.2迁移相关蛋白表达水平比较

干预8周后，两组MMP-2、MMP-9表达较干预前降低（P<0.05），E-钙黏蛋白表达较干预前升高（P<0.05），研究组变化幅度大于对照组（P<0.05）。见表2。

表2迁移相关蛋白表达水平比较（±s，相对值）

2.3血清肿瘤标志物水平比较

干预8周后，两组血清CEA、CYFRA21-1水平均较干预前降低（P<0.05），研究组降低幅度大于对照组（P<0.05）。见表3。

表3血清肿瘤标志物水平比较（±s，ng/mL）

2.4不良反应发生率对比

两组不良反应发生率相近，P>0.05。见表4。

表4不良反应发生率对比[n（%）]

3讨论

肿瘤转移是一个多步骤、多因素参与的复杂病理过程，其中癌细胞的迁移与侵袭能力是转移发生的关键环节。肺癌细胞通过降解细胞外基质（ECM）、突破基底膜屏障，进而实现远处定植，这一过程依赖于多种蛋白酶及黏附分子的协同作用^[4]。基质金属蛋白酶（MMPs）家族是降解ECM的核心酶类，其中MMP-2和MMP-9可特异性降解基底膜中的Ⅳ型胶原，破坏肿瘤细胞侵袭的物理屏障，其高表达与肺癌的临床分期进展、淋巴结转移及不良预后密切相关。而E-钙黏蛋白作为一种上皮细胞黏附分子，可维持细胞间的紧密连接，抑制肿瘤细胞的离散与迁移，其表达下调被认为是肿瘤上皮-间质转化（EMT）的重要标志，也是肺癌细胞获得侵袭能力的关键机制之一。因此，调控MMP-2、MMP-9及E-钙黏蛋白的表达，成为开发肿瘤转移抑制药物的重要靶点。

孢子油作为近年来备受关注的天然活性物质，其主要活性成分三萜类化合物具有广泛的药理作用^[5]。已有体外研究证实，三萜类化合物可通过抑制MMPs活性、上调黏附分子表达等途径，抑制肝癌、乳腺癌等肿瘤细胞的迁移与侵袭^[6]。但这些研究多基于细胞系实验，缺乏临床样本的验证，其在人体内的作用效果及安全性尚不明确。本研究以ⅢB-Ⅳ期肺癌患者为研究对象，探讨孢子油成分联合常规化疗对癌细胞迁移侵袭能力的影响，结果显示，干预8周后，研究组癌细胞迁移穿透率及侵袭率显著低于对照组，提示孢子油成分可显著增强化疗对肺癌细胞迁移侵袭能力的抑制效应。

为进一步明确孢子油成分的作用机制，本研究检测了肿瘤组织中MMP-2、MMP-9及E-钙黏蛋白的表达水平。结果显示，研究组干预后MMP-2、MMP-9相对表达水平显著低于对照组，而E-钙黏蛋白相对表达水平显著高于对照组。这一结果与体外实验结论一致，表明孢子油成分可能通过下调MMP-2、MMP-9的表达，减少ECM的降解，同时上调E-钙黏蛋白的表达，增强肿瘤细胞间的黏附能力，从而共同抑制肺癌细胞的迁移与侵袭^[7-8]。此外，血清肿瘤标志物CEA、CYFRA21-1作为肺癌诊断及疗效评估的重要指标，其水平变化与肿瘤负荷及增殖活性密切相关。本研究中研究组干预后CEA、CYFRA21-1水平显著低于对照组，进一步证实了孢子油成分联合化疗对肺癌细胞的抑制效果。

安全性是临床用药的首要考量，尤其是对于晚期癌症患者，辅助治疗药物的不良反应直接影响患者的生活质量及治疗依从性。本研究结果显示，研究组不良反应总发生率与对照组比较无显著差异，且未出现Ⅲ级以上严重不良反应，表明孢子油制剂与常规化疗药物联合使用时，无明显不良反应叠加风险，具有较好的安全性，这一结果为孢子油成分的临床应用提供了重要保障。

综上所述，孢子油成分可通过下调MMP-2、MMP-9蛋白表达及上调E-钙黏蛋白表达，显著抑制肺癌细胞的迁移与侵袭能力，且联合常规化疗无明显不良反应叠加风险，具备作为肿瘤转移抑制辅助治疗手段的临床潜力。

参考文献

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[2]张翠翠,刘敏.微波消融联合常规化疗方案治疗晚期非鳞状非小细胞肺癌的临床效果[J].临床医学研究与实践,2025,10(27):68-71.

[3]井子良,吴纯宇,张慧敏,等.灵芝孢子油番茄红素复合物的抗肿瘤作用[J].现代食品科技,2022,38(9):46-51.

[4]张娜,周敬奎.重组人血管内皮抑制素联合TP化疗方案治疗非小细胞肺癌患者的效果[J].中国民康医学,2025,37(5):47-49.

[5]彭学翰,谢文敏,李霁,等.灵芝孢子油体外抗肿瘤活性比较研究[J].中国药科大学学报,2019,50(1):81-86.

[6]张宇,侯丽慧,王乐,等.灵芝孢子粉指纹图谱建立及灵芝孢子油抗炎活性研究[J].国际老年医学杂志,2025,46(1):78-84.

[7]林志彬.灵芝孢子油的药效物质基础研究进展[J].菌物研究,2024,22(1):79-87.

[8]康霞红,李萍.灵芝孢子油化学成分及药理作用研究进展[J].中国中药杂志,2025,50(8):2071-2079.